Analysis of Efflux Pump Genes in β-lactam Resistant Clinical Isolates of Pseudomonas aeruginosa from a Tertiary Level Hospital in Ecuador

  • Isaac Armendáriz-Castillo
  • Marcelo Grijalva
  • María José Vallejo
  • Patricia Jiménez
##plugins.pubIds.doi.readerDisplayName## https://doi.org/10.26807/remcb.v38i1.20

Resumen

Pseudomonas aeruginosa es un microorganismo responsable de una amplia variedad de infecciones y es uno de los principales patógenos multiresistentes ante antibióticos β-lactámicos. Uno de los principales mecanismos de resistencia en P. aeruginosa constituyen las bombas de eflujo. El objetivo del presente estudio fue caracterizar el mecanismo de bombas de eflujo mediante el estudio de expresión de 4 genes (mexA, mexX, oprJ y oprM) involucrados en este mecanismo en Pseudomonas aeruginosa. Cuarenta aislados clínicos (20 resistentes y 20 sensibles) fueron recolectados en el Laboratorio de Bacteriología del Hospital “Carlos Andrade Marin” en Quito-Ecuador. Los niveles de expression de los genes seleccionados fueron evaluados por RT-qPCR usando RpsL como gen constitutivo para el análisis de cuantificación relativa basado en el método ΔΔCt ajustado. La importancia de las bombas de eflujo como mecanismos de resistencia fue confirmada ya que el estudio de expresión de los genes relacionados con bombas de eflujo mostró sobreexpresión de ellos en todos los aislados fenotípicamente resistentes. Se realizó además un análisis fenotipo/genotipo comparando los resultados del antibiograma (AST) con los perfiles de expresión. La sobreexpresión de mexA (genotipo) mostró correlación con el fenotipo de resistencia a TPZ, mientras que el genotipo mexX se correlacionó con los fenotipos de resistencia a IPM, MEM y FEP. En conclusion, los patrones de expression de los genes relacionados con bombas de eflujo sugieren la presencia de mecanismos de resistencia basados en transmisión horizontal que posibilitan la diseminación de patógenos en el ambiente hospitalario.

Citas

BoBolha L, Dusanic D, Narat M , Oven I. 2012. Comparison of methods for relative quantification of gene expression using Real-time PCR. Acta argiculturae Slovenica 100(2):97–106.

Breidenstein E, de la Fuente C, Hancock R. 2011. Pseudomonas aeruginosa: all roads lead to resistance. Cell Press 19(8): 419–426.

Guzmán-Blanco M and Istúriz R. 2010. Antimicrobial Drug Resistance in Latin America and the Caribbean. In: Sosa A, Byarugaba D, Amábile-Cuevas C, Hsueh P, Kariuki S and Okeke, I (eds) Antimicrobial Resistance in Developing Countries: 331–345. Springer. New York.

Khan-Malek, Wang Y. 2011. Statistical Analysis of Quantitative RT-PCR Results. Methods in Molecular Biology 691(1):227–241.

Lister P, Wolder D, Hanson N. 2009. Antibacterial-Resistant Pseudomonas aeruginosa: Clinical impact and complex regulation of chromosomally encoded resistance mechanisms. Clinic Microbiology Review 22(4):582–610.

Meletis G, Begkeri M. 2013. Pseudomonas aeruginosa: Multi-Drug-Resistance Development and Treatment Options. Infection Control. En: Silpi B (ed). Infection Control. In Tech, Croatia. DOI:10.5772/55616.

Morita Y, Tomida J, Kawamura Y. 2012. MexXY multidrug efflux system of Pseudomonas aeruginosa. Frontiers in microbiology 3(1):408–415.

Nolan T, Hands R, Bustin S. 2006. Quantification of mRNA using real-time PCR. Nature protocols 1(3):1559–1582.

Wong M, Medrano J. 2005. Real-Time PCR for mRNA quantitation. BioTechniques 39(1):75–85.

Yuan J, Wang D and Stewart J. 2008. Statistical methods for efficiency adjusted real-time PCR quantification. Biotechnology Journal 3(1):112–123.
Publicado
2017-05-30
Cómo citar
ARMENDÁRIZ-CASTILLO, Isaac et al. Analysis of Efflux Pump Genes in β-lactam Resistant Clinical Isolates of Pseudomonas aeruginosa from a Tertiary Level Hospital in Ecuador. Revista Ecuatoriana de Medicina y Ciencias Biológicas, [S.l.], v. 38, n. 1, mayo 2017. ISSN 2477-9148. Disponible en: <http://remcb-puce.edu.ec/index.php/remcb/article/view/20>. Fecha de acceso: 20 nov. 2017 doi: https://doi.org/10.26807/remcb.v38i1.20.
Sección
Artículos Científicos