1
I
n
t
e
r
a
c
c
i
ó
n
i
n vitro
e
n
l
í
n
e
a
s
c
e
lulares de c
áncer humano del
ex
tracto de
Crotón micans
con
1
f
ármacos quimioterap
éuticos
2
3
In vitro
interaction in human cancen cell lines of the extract of
Croton micans
w
ith
4
chemotherapeutic
drugs
5
6
Luis José Rodríguez Mier y Teran
1
,
Samuel Alejandro Rodríguez López
2
,
Izaskun Urdanibia Ascanio
3
,
7
Alirica Isabel Suárez
4
8
9
1
Clínica RedSalud Providencia. Chile.
ORCID:0000
-
0009
-
7793
-
2111.
Autor de correspondencia:
10
siuljoseluis@hotmail.com
11
12
2
Universidad de Carabobo
,
Facultad de Ciencias de la Salud, Escuela de Medicina Dr. Witremundo
13
Torrealba,
. Venezuela.
ORCID:0000
-
0002
-
2964
-
6492.
samrolopez@gmail.com
14
15
3
Instituto de Investigación Biomédica de Lleida, Fundación Dr. Pifarre (IRBLleida). Grupo de
16
Biomarcadores en Cáncer. España
.
ORCID: 0000
-
0003
-
1261
-
3181.
iurdanibia@gmail.com
17
18
4
Facultad de Farmacia, Universidad Central de Venezuela. Venezuela
.
ORCID: 0000
-
0002
-
3317
-
5179.
19
alirica1@yahoo.es
20
21
R
esumen.
-
Los agentes quimioterapéuticos Doxorrub
icina y el Paclitaxel han sido cuestionados desde
22
hace algún tiempo, por los efectos negativos observados en algunos pacientes, cuando se usan en
23
concentraciones altas. Sin embargo, estudios han demostrado que productos de origen natural muestran
24
sinergia
con estos fármacos reduciendo la dosis. En función de esa problemática se planteó
determinar
25
el efecto
in vitro
del extracto del
Crotón micans
, en líneas celulares de cáncer humano, y su posible
26
interacción con ambos fármacos. Se estudiaron los dos fármaco
s, y el extracto de
C. micans
en las
27
líneas celulares MCF
-
7 y PC3. Se analizó la naturaleza de las interacciones entre los productos
28
naturales y los fármacos quimioterapéuticos calculando el correspondiente índice de combinación (CI)
29
y el índice de reducci
ón (IDR). Se encontró que el extracto, no tiene efecto citotóxico y si un efecto
30
citostático sobre las líneas celulares estudiadas. Las combinaciones Doxorrubicina/
C. micans
,
31
permitieron reducir la concentración del fármaco de 3,9 veces para inhibir la via
bilidad celular en un
32
50% en la línea PC3, mientras que
para MCF
-
7, se obtuvo un IDR de la dosis de 2,29
. En lo que
33
respecta a la combinación
del extracto y Paclitaxel solo mostro efecto sinérgico sobre la viabilidad
34
celular de la línea PC3 con un IDR de 2
,9.
35
36
Palabras clave:
Antraciclinas,
Doxorrubicina
,
Euphorbiaceae
, MCF
-
7, Paclitaxel, PC3,
37
Quimioterapéuticos,
Sinergia
38
39
40
ABSTRAC
T.
-
The chemotherapeutic agents Doxorubicin and Paclitaxel have been questioned for
41
some time due to the negative effects observed in some patients when used in high concentrations.
42
However, studies have shown that products of natural origin display synergy wi
th these drugs,
43
reducing the dose. Based on this problem, it was proposed to determine the in vitro effect of
Croton
44
micans
extract on human cancer cell lines and its possible interaction with both drugs. Doxorubicin,
45
Paclitaxel, and
C. micans
extract were
studied in the MCF
-
7 breast cancer and PC3 prostate cancer cell
46
lines. The nature of the interactions between the natural products and the chemotherapeutic drugs was
47
2
analyzed by calculating the corresponding combination index (CI) and the dose reduction i
ndex (DRI).
48
It was found that the extract has no cytotoxic effect but does have a cytostatic effect on the studied cell
49
lines. The Doxorubicin/C. micans combinations allowed for a reduction in the drug concentration by
50
3.9 times to inhibit cell viability b
y 50% in the PC3 line, while for MCF
-
7, a DRI of 2.29 was
51
obtained. Regarding the combination of the extract and Paclitaxel, it only showed a synergistic effect
52
on the cell viability of the PC3 line with a DRI of 2.9.
53
54
Keywords:
Anthracyclines, Doxorubici
n, Euphorbiaceae, MCF
-
7, Paclitaxel, PC3,
55
Chemotherapeutics, Synergy
56
57
58
59
I
ntroducción
60
61
El Crotón es el género más grande de la subfamilia Crotonoideae (Euphorbiaceae) con unas 1.300
62
especies a nivel mundial y unas 80 especies endémicas en Venezuela (Berry et al. 2005). Muchas
63
partes de las plantas (raíces, hojas, corteza, tallos y sabia) de
este género son utilizadas en diversas
64
regiones de América, África y Asia por sus diferentes propiedades terapéuticas (Salatino et al. 2007).
65
66
Varias especies venezolanas pertenecientes al género Croton han sido caracterizadas y se ha estudiado
67
sus propie
dades farmacológicas. Extracto acuoso del
C. cuneatus
posee efecto antiinflamatorio (
Suárez
68
et al., 2006)
, l
a corteza de
C. malambo
se utiliza para tratar enfermedades tales como: diabetes, diarrea,
69
reumatismo, úlceras gástricas, así como también por sus efectos antiinflamatorios, antimicrobiana,
70
anticonceptivo (Suárez et al. 2003; Suárez et al. 2008). Extractos de la especie
C. carac
asana
71
mostraron tener actividad citotóxica en líneas celulares de cáncer humano (
Suárez et al., 2009). Por
72
otra parte, de la especie
C. micans
se aislaron compuestos, los cuales mostraron efecto citotóxico sobre
73
diferentes tipos diferentes de células tumor
ales humanas (Mateu et al.,2012; Vivas et al., 2013;
74
Martínez et al. 2019) y del látex de
C.
gossypiifolius
se encontró un potente efecto antimicrobiano
75
frente a diferentes bacterias patógenas (Godoy et al. 2020).
76
77
Ese efecto en la proliferación en células
tumorales mostrado por el
C. micans
, resulta relevante para la
78
comunidad científica, ya que, según la Organización Panamericana de la Salud (OPS), el cáncer
79
representa una de las principales causas de muerte en todo el mundo. Según datos que posee esta
80
in
stitución para el año de 2022 en territorio americano causó aproximadamente 1,4 millones de
81
muertes, siendo el grupo más numeroso aquel que incluía desde los jóvenes hasta los 69 años de edad,
82
representando un 45,1% (OPS, 2014). Estos números han motivado
a la comunidad científica a buscar
83
nuevas moléculas con potencial quimioterapéutico en productos de origen natural. Los productos
84
medicinales de origen natural tienen la ventaja de tener efectos secundarios mínimos o nulos en
85
comparación con las drogas sin
téticas (Suárez y Chávez, 2018). Entre las plantas con más potencial
86
fitofarmacológico para combatir el cáncer destacan,
Citrus limettioides, Origanum onites, Artemisia
87
campestris, Rosmarinus officinalis, Thymelaea hirsute, Croton matourensis
y
Croton mica
ns
(Sharma
88
et al. 2023). Es tal la importancia de los productos naturales que un estudio publicado por Alves et al.
89
(2021) menciona que durante el periodo comprendido entre 1981 y 2014, aproximadamente un 52% de
90
las moléculas aprobadas para su uso en la i
ndustria farmacéutica derivaron de productos naturales o
91
sus derivados. El reporte estima que de las 131 moléculas con potencial antitumoral aprobadas en ese
92
mismo período 85 eran de origen naturales, lo que representa un 64,88%.
93
94
95
3
El otro problema asocia
do con el tratamiento de cáncer es que algunos fármacos presentan respuestas
96
negativas en algunos pacientes cuando se usan altas concentraciones. Estudios han demostrado que las
97
antraciclinas pueden ser toxicas cuando se emplean en altas concentración, en
el caso de la
98
Doxorrubicina (> 500mg/m
2
) (
Velásquez et al. 2016; Madonna et al. 2017; Mattioli et al. 2023)
. En lo
99
que respecta al Paclitaxel el uso de contracciones elevadas (> 0,05 μmol/L) puede estar asociadas con
100
el desarrollo de neuropatías (
Mielke et
al. 2005
)
. Estudios como estos han alertado a la comunidad
101
científica, lo que ha limitado su uso en algunos países.
102
103
En vista de que el
C. micans
posee un alto potencial farmacológico (Suárez et al. 2012) y tomando en
104
consideración que las altas concentraciones de Doxorrubicina y la Paclitaxel están contraindicada, se
105
propuso en este estudio combinar un extracto del
C. micans
con los fármacos antes
mencionados,
106
frente a líneas celulares de cáncer de mama (
MCF
-
7)
y cáncer de próstata (
PC3)
para observar si
107
existía algún efecto en la proliferación celular.
108
109
110
M
ateriales y Métodos
111
112
Material Vegetal
.
-
Las hojas de
C. micans
en periodo de floración fueron
colectadas en Ocumare de la
113
Costa, estado Aragua, Venezuela
. El género fue confirmado por el Dr. Stephen Tillett Botánico de la
114
Universidad Central de Venezuela (Caracas
-
Venezuela).
115
116
Extracción de los compuestos bioactivos
.
-
Se empleó la metodología propuesta por
Compagnone
et
117
al. (2010), con modificaciones. El extracto obtenido (aceite esencial) fue disuelto en Dimetil sulfoxido
118
(DMSO) y las concentraciones evaluadas fueron 0,1; 0,3; 1; 3; 10; 30 y 100 µg/ml.
119
120
Fármacos
.
-
La
Doxorrubicina (D5220) y el Paclitaxel (580555) ambos de la casa comercial
Sigma
121
Aldrich, USA.
122
123
Líneas celulares
.
-
Línea celular MCF
-
7 de cáncer de mamá humano y la línea celular PC3 de cáncer
124
de próstata humano.
125
126
Cultivo de las líneas celulares
.
-
Se utiliz
ó para la línea MCF
-
7, se empleó la metodología propuesta
127
por Gupta et al. (2017), usando el medio DMEM (Dulbecco`s modified Eagle`s medium, Sigma
128
Aldrich, USA) 3,7 g/L de NaHCO
3
, (Merck, Alemania), suplementado con 5 % suero fetal bovino
129
(Gibco, BRL, USA)
, 2 mM de L
-
glutamina (Sigma Aldrich, USA), 5 mM de HEPES (Sigma Aldrich,
130
USA), 100 U/ml de antibióticos (penicilina/estreptomicina, Sigma Aldrich, USA) y 2.5 g/L de glucosa
131
(Sigma Aldrich, USA). Para la línea celular de PC3 se empleó la metodología propue
sta por
Raeisi et
132
al. (2019), usando el medio
HAM
-
F12 (Nutrient Mixture F
-
12 Ham, Sigma Aldrich, USA), 1,2 g/L de
133
NaHCO
3
(Merck, Alemania), suplementado con 10 % SFB, 2 mM de L
-
glutamina, 5 mM de HEPES
134
(Sigma Aldrich, USA) y 100 U/ml de 100 U/ml de
antibióticos (penicilina/estreptomicina, Sigma
135
Aldrich, USA)
. Ambos cultivos se incubaron a 37°C en una atmosfera humificada de 5% CO
2
.
136
137
Ensayo de citoxicidad
in vitro
.
-
Ensayo de citotoxicidad con
Sulforrodamina B
(SRB) usando la
138
metodología propuesto por
Vajrabhaya et al. (2018)
. Se ajustó el número de células/ml (10 x 10
3
139
células/100 μl por pozo) para cada ensayo y se sembraron en placas de 96 pozos a un volumen 100 μl
140
de medio específico por pozo. Para el ensayo
se tomaron dos placas una placa T = “0” y otra T = “48
141
h”. En la placa T=0 se colocaron 6 pozos con la suspensión celular, y en otros 6 pozos medio de
142
cultivo, pero sin células para usar como blanco
.
Las placas se incubaron sin tratamiento por 24 h.
143
4
Transc
urrido el tiempo, se agregaron 25 μl de ácido tricloroacético 1% a cada pozo, incluyendo los
144
pozos blancos y se incubaron por 1 h a 4 ºC para la fijación. Luego se descartó el medio, se hicieron 5
145
lavados con 200 μl de agua bidestilada desionizada, se secó
y se guardó protegida de la luz. A la placa
146
T = 48 h, se le descartó el sobrenadante de los pozos en condiciones estériles, y se agregó en un
147
volumen de 100 μl de las diferentes concentraciones. Se incubó por 48 h y se agregaron 25 μl de ácido
148
tricloroacé
tico 1% y se incubó por 1 h a 4 ºC, de la misma manera que se hizo con la placa T=0. En
149
ambas placas se agregaron 50 μl/pozo de SRB al 4%, se incubó por 20 min a temperatura ambiente
150
(protegiendo de la luz), se descartó el colorante, se hicieron 5 lavados
con ácido acético 1%, se
151
agregaron 100 μl/pozo de trizma base 10 mM, se dejó por 5 min y se leyó la absorbancia a 515 nm en
152
un lector de placas ELISA.
153
154
Ensayo de combinación del extracto de
C. micans
con los fármacos quimioterapéuticos
.
-
Para las
155
dos líne
as celulares (MCF
-
7 y PC3), se evaluó el intervalo de concentraciones comprendidos entre
156
0,1 y 100 µg/ml del extracto y entre 0,07 y 50 µg/ml de los fármacos quimioterapéuticas. Para
157
examinar la posibilidad de que el extracto de
C. micans
pudieran potencia
r los efectos de
158
Doxorrubicina y de Paclitaxel, sobre la viabilidad de las células MCF
-
7 y PC3, se diseñaron sus
159
combinaciones de la siguiente manera: [droga]/[extracto] = 0,07/0,1; 0,21/0,3; 0,62/1; 1,85/3;
160
5,56/10; 16,7/30 y 50/100 (en unidades de µg/ml)
.
161
162
163
Análisis Estadístico
.
-
Con los datos obtenidos se elabora una curva dosis
-
respuesta con un análisis de
164
regresión no lineal utilizando el algoritmo NCI. Tras la generación de la curva, se obtienen los
165
siguientes parámetros llevando a cabo una
interpolación de la misma: la concentración necesaria para
166
inhibir el 50% del crecimiento celular (GI
50
), inhibición total de crecimiento (TGI) y la citotoxicidad
167
en la forma de concentración de compuesto que causa la muerte de la mitad de la población cel
ular
168
(LC
50
) (GraphPadPrism 4.0., San Diego, USA).
Se analizó la naturaleza de las interacciones entre el
169
extracto de
C. micans
y los fármacos quimioterapéuticos (Doxorrubicina y Paclitaxel) y se calculó el
170
correspondiente índice de combinación (CI) median
te
el programa CalcuSyn versión 2.0 (Biosoft,
171
Cambridge, UK)
a través dela ecuación de Chou
-
Taladay,
el cual se fundamenta en
una evaluación
172
matemática cuantitativa de la interacción farmacológica entre dos fármacos, donde valores de CI <1
173
indican sinergis
mo (cuanto menor es el valor, mayor es el grado de sinergismo) CI = 1 indica
174
aditividad, y CI> 1 indican antagonismo (
Chou, 2006)
.
Los resultados fueron expresados como el
175
promedio más o menos el error estándar medio (S.E.M.) de al menos 3 experimentos ind
ependientes
176
(X
S.E.M). Los IC
50
, fueron obtenidos mediante análisis de regresión no lineal (GraphPadPrism 4.0.,
177
San Diego, USA). Cada relación CI se representa como la media de al menos tres experimentos
178
independientes. Los valores de CI fueron analizad
os mediante la prueba
t
de Student.
179
180
181
R
esultados
182
183
Actividad citotóxica y citostática del extracto de
C. micans
y de los fármacos Doxorrubicina y
184
Paclitaxel sobre la viabilidad de líneas celulares PC3 y MCF
-
7
185
186
Para conocer si los componentes del extracto del
C. micans
eran tóxicos para la célula, se evaluó el
187
efecto citotóxico y citostático sobre ambas líneas celulares. De manera adicional también se evaluaron
188
los fármacos Doxorrubicina y Paclitaxel. Los resulta
dos se presentan en la tabla
1
.
189
190
191
5
El extracto de
C. micans
mostró tener mayor actividad citostática observándose su efecto a
192
concentraciones menores de 29 µg/ml en ambas líneas celulares; y a su vez se evidenció una inhibición
193
del 50% del crecimiento sobre
la línea MCF
-
7 a concentraciones 3 veces menores que sobre PC3. El
194
extracto mostró no tener actividad citotóxica significativa a concentraciones menores de 100 µg/ml. Se
195
observó que en ambas líneas celulares la Doxorrubicina inhibe totalmente el crecimien
to a
196
concentraciones menores de 3 µg/ml, mientras que el Paclitaxel a concentraciones menores de 13
197
µg/ml. Se observó también, que la línea PC3 es más sensible a el Paclitaxel (LC
50
= 36,34 µg/ml);
198
mientras que la línea MCF
-
7 es a la Doxorrubicina (LC
50
=
21,72 µg/ml) (Tabla
1
).
199
200
E
fecto de la combinación del extracto de
C. micans
con los fármacos Doxorrubicina y Paclitaxel
201
sobre las líneas celulares PC3 y la MCF
-
7
202
203
En la segunda fase del estudio se evaluaron intervalos de concentraciones comprendidos entre 0,1 y
204
100 µg/ml del extracto y de las drogas quimioterapéuticas entre 0,07 y 50 µg/ml, sobre ambas líneas
205
celulares. Los datos fueron analizados y se les determinó
el valor de
IC
50
a cada uno. Los resultados
206
se muestran en la
tabla 2
.
207
208
El
extracto mostró valores de IC
50
muy cercanos entre sí para las dos líneas celulares, un
209
comportamiento parecido fue observado para la Doxorrubicina en las dos líneas celulares. En lo que
210
respecta al Paclitaxel el comportamiento no fue el mismo que el observado para el otro fármaco,
211
mien
tras que para la línea PC3 se determinó un valor de 5,7
μg/mL, en la MCF
-
7, para
todo el intervalo
212
de concentraciones ensayado se observó una inhibición prácticamente constante y cercana al 50%,
213
sugiriendo que se había alcanzado la meseta en la curva de in
hibición de la viabilidad vs las
214
concentraciones de la droga.
215
216
Para determinar la posibilidad de que el extracto de
C. micans
,
pudiera potenciar los efectos de
217
Doxorrubicina y de Paclitaxel, sobre la viabilidad de las células PC3 y MCF
-
7, se evaluaron dife
rentes
218
combinaciones [droga]/[extracto].
La ausencia de efectos dependientes de las concentraciones de
219
Paclitaxel en las células MCF
-
7 (
F
igura 1) impidió el análisis de las combinaciones de ese fármaco
220
con el extracto,
debido a las restricciones que el pro
grama CalcuSyn
®
.
Los resultados obtenidos
221
después del análisis de los resultados se muestran en la figura
1
.
222
223
224
Como se puede observar en la figura 1, ocurrió una variación de los índices de combinación con las
225
fracciones afectadas por cada una de las
combinaciones. Las gráficas que muestran los efectos de las
226
combinaciones del extracto con las células PC3 (figura 1) exhiben perfiles muy similares y claramente
227
sinérgicos para las menores fracciones afectadas mientras que la correspondiente a la figura 1
C
228
muestra un perfil diferente. Este hallazgo indica que en las células MCF
-
7, se obtiene una mayor
229
probabilidad de alcanzar sinergia cuando las fracciones afectadas se encuentran alrededor de 0,75 (es
230
decir, cuando la inhibición de la viabilidad es del 7
5%) cuando se combinan la Doxorrubicina con el
231
extracto en la proporción de 1/1,6. Estos resultados nos indican que, en todas las combinaciones
232
ensayadas, los índices de combinación están por debajo de la unidad cuando la fracción afectada es
233
igual 0,5 (50
% de inhibición de la viabilidad).
234
235
Para poder estimar el grado en el que las dosis de uno o más agentes en la combinación pueden ser
236
reducidas para alcanzar efectos que sean comparables con aquellos alcanzados por los agentes solos, se
237
determinaron los í
ndices de reducción de las dosis (IRD). En la tabla 3 se incluyeron los valores de
238
6
esos índices, además de los correspondientes índices de combinación (CI). En la siguiente tabla se
239
resume como fueron los índices determinados en este ensayo.
240
241
La Tabla 3,
muestra como los co
-
tratamientos de Doxorrubicina y
Paclitaxel
con el extracto de
C.
242
micans
indujo un efecto sinérgico afectando la viabilidad de las células PC3 comparados con las
243
drogas administradas individualmente. Todos los CI
50
mostrados son signific
ativamente inferiores a la
244
unidad. Esa afirmación se basa en los valores del coeficiente de correlación lineal (que indica el ajuste
245
de los datos a la ecuación de Chou
-
Talalay), donde u
n valor de r >0,9 se considera como
246
estadisticamente favorable.
En lo q
ue respecta las células MCF
-
7, se puede observar que la fracción
247
afectada corresponde a casi un 50% de inhibición de la viabilidad, los índices de combinación (CI
50
) y
248
los índices de reducción de las dosis (IRD
50
) señalan con claridad que los efectos de la
s combinaciones
249
del extracto y la Doxorrubicina son sinérgicos. Este efecto sinérgico fue más representativo (2,29) que
250
los obtenidos con las mismas combinaciones en las células PC3.
251
252
253
D
iscusión
254
255
Los resultados encontrados con respecto a la citotoxicidad (tabla 1), sobre células cancerígenas
256
coinciden con los reportados por Campagnone et al. (2010), quienes evaluaron el aceite esencial del
257
C. micans
y demostraron que los componentes fitoquímicos te
nían citotoxicidad moderada contra
258
LoVo (carcinoma de colon), X
-
17 (carcinoma de colon), HeLa (cáncer de cuello uterino) y las
259
células control. Esa capacidad antiproliferativa fue confirmada por un estudio hecho por Vivas et al.
260
(2013), quienes evaluaron a
l ácido caracasina (monómero) y el ácido micansinoico (dímero),
261
pertenecientes al grupo de los seco
-
ent
-
kaurenos (aislados de
C. micans
) y encontraron inhibición
262
en el crecimiento de PC3 y de las células normales de una manera dependiente de la dosis despu
és
263
de la exposición a ambos productos naturales. Estos dos seco
-
ent
-
kaurenos exhibieron
264
prácticamente una actividad citotóxica similar contra células tumorales humanas, pero no contra
265
células normales. Los hallazgos de este estudio reafirman el potencial
citotóxico de los
266
componentes presentes en las hojas del
C. micans
sobre diferentes líneas celulares cancerígenas.
267
268
269
En lo que respecta al ensayo donde se evaluó el efecto de las concentraciones del extracto y de las
270
drogas Doxorrubicina y Paclitaxel por s
eparado (ver tabla 2), resalta el comportamiento de las dos
271
líneas celulares con el extracto, ya que se encontró que los IC
50
tuvieron valores muy cercanos, lo
272
que sugiere un mecanismo similar de inhibición en la proliferación celular. La Doxorrubicina
273
mo
stró valores de IC
50
muy parecidos entre sí. Sin embargo, en la MCF
-
7 se encontró un valor de
274
IC
50
de 0,16 µg/ml, lo cual indica que esta droga tiene efectos citotóxicos más potentes que en las
275
células PC3 (2,0 µg/ml). Este resultado coincide con el report
ado por Pan et al. (2017), quienes,
276
haciendo experimentos de 48h de duración, reportaron un valor aproximado de 0,20 µg/ml para el
277
IC
50
inhibitorio de la viabilidad para la Doxorrubicina en las células MCF
-
7. Por otra parte, los
278
resultados obtenidos en las
células MCF
-
7 tratadas con Paclitaxel son muy diferentes a los
279
observados en las PC3, en el intervalo de concentraciones ensayado con Paclitaxel (entre 0,07 y 50
280
µg/ml) se observó una inhibición prácticamente constante y cercana al 50%, sugiriendo que se
había
281
alcanzado la meseta en la curva de inhibición de la viabilidad vs las concentraciones de la droga.
282
Este comportamiento fue reportado por Haghnavaz et al. (2017), quienes empleando el ensayo del
283
MTT en células MCF
-
7 tratadas por 24h con concentracione
s de Paclitaxel comprendidas entre
284
0,107 y 6,848 µg/ml observaron porcentajes de inhibición cercanos al 70%, con poca variabilidad
285
en el tiempo.
286
7
287
La sinergia observada en este estudio para la línea PC3 coincide con la reportada por Vivas et al.
288
(2013), qu
ienes estudiaron la combinación del ácido de caracasina y el ácido micansinoico,
289
(derivados de
C. micans
), con los fármacos Doxorrubicina y Paclitaxel, frente a línea celular de
290
cáncer de próstata (PC3) y fibroblastos de dermis humana (células control). El
los observaron
que
291
los dos ácidos en combinación con los fármacos mostraron un efecto sinérgico sobre las células
292
tumorales, resultando que la combinación de Doxorrubicina con
ácido de caracasina o el ácido
293
micansinoico
fue más efectiva que con
Paclitaxel
.
En lo que respecta a la línea MCF
-
7, no existen
294
reportes en la literatura donde se haya evaluado la combinación del extracto con estos fármacos
295
quimioterapéuticos. Sin embargo, se observó
un índice de reducción de la dosis de 2,29 en el caso de
296
las combin
aciones Doxorrubicina/
C. micans
, teniendo mayor sensibilidad que la observada por la línea
297
celular de PC3. Un estudio similar fue realizado por
Wang et al. (2016), quienes evaluaron si la
298
combinación de un conjugado de DDanshensu (omponente activo de la
Salvia miltiorrhiza
) con la
299
Doxorrubicina en la MCF
-
7. Entre lo más destacado del estudio resalta que el tratamiento conjunto de
300
DT
-
010 con el medicamento aumentó la apoptosis en células MCF
-
7 en relación con el fármaco solo,
301
se concluyó que la combinación
del conjugado con la Doxorrubicina confiere el efecto sinérgico
302
antitumoral en las células de cáncer de mama MCF
-
7 a través de la regulación negativa de la vía
303
glucolítica y la inhibición de la expresión de GRP78.
304
305
Analizando estos resultados se pudiera
presumir que, se pude disminuir las dosis de la Doxorrubicina y
306
el
Paclitaxel
en los tratamientos quimioterapéuticos, cuando se combina con un producto de origen
307
natural. Hacen falta más ensayos
in vitro
, con otras líneas celulares tanto cancerígenas como
no
308
cancerígenas, para confirmar que el extracto es seguro y para evaluar diferentes mecanismos
309
bioquímicos de acción de los compuestos presentes en el extracto de
C. micans
, para conocer cómo
310
actúa en metabolismo celular, para de esa forma pensar en realiz
ar ensayo
in vivo
.
311
312
C
onclusiones
313
314
En el estudio no se incluyó como control una línea celular no cancerígena, que permitiera corroborar el
315
comportamiento de la moderada citotoxicidad del extracto evaluado y el posible efecto de la
316
combinación de este con l
os fármacos, por lo que no se puede asegurar que el comportamiento
317
observado es extrapolable a otro tipo de células. Sin embargo, se pudo observar que el extracto de
C.
318
micans,
posee efecto sobre la proliferación celular de cáncer de mama (MCF
-
7) y próstat
a (PC3)
319
inhibiendo su crecimiento.
En todas las combinaciones ensayadas, el extracto incrementó los efectos
320
de las drogas quimioterapéuticas sobre la pérdida de la viabilidad celular, siendo las combinaciones
321
con Doxorrubicina las que mostraron el mayor ef
ecto sinérgico. Hacen falta más ensayos
in vitro
con
322
otras líneas celulares, para poder confirmar sin son reproducibles y de esa forma planificar ensayos en
323
modelos animales.
324
325
A
gradecimientos
326
327
Al laboratorio de Patología Celular y Molecular del Centro de Medicina Experimental del Instituto
328
Venezolano de Investigación Científicas (IVIC) los Teques
-
Venezuela y a todo el personal del
329
Herbario Dr. Víctor Manuel Ovalles de la Facultad de Farmacia, Un
iversidad Central de Venezuela
330
(Caracas
-
Venezuela).
331
332
333
C
onflicto de intereses
334
8
335
Los autores declaran que no tienen conflicto de intereses en este estudio. El Estudio fue financiado con
336
recursos del laboratorio de Patología Celular y Molecular del Centro de
Medicina Experimental del
337
Instituto Venezolano de Investigación Científicas (IVIC) los Teques
-
Venezuela.
338
339
340
C
ontribución de los autores
341
IUA: diseño de los experimentos, análisis de los resultados y revisión de la redacción. SAR: desarrollo
342
experimental, r
edacción, traducción del abstrac. LJR: desarrollo experimental, redacción y análisis de
343
los resultados.
344
345
346
347
R
eferencias
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462
463
464
465
466
467
468
469
470
471
472
Figura 1.
Valores de los índices de combinación (CI)
graficados como una función de las fracciones afectadas
473
en las combinaciones binarias indicadas en los títulos de cada gráfica.
Las curvas con líneas sólidas son gráficas
474
simuladas por computadora y los círculos negros representan valores experimentales de
los CI. Las líneas
475
punteadas por encima y por debajo de las curvas sólidas corresponden a los CI (multiplicados por ± 1,96 veces
476
11
las desviaciones estándar) calculados con el programa CalcuSyn® y representan los límites (superior e inferior)
477
de los CI que
permanecen dentro del intervalo de confianza del 95%. Los valores de CI <1 indican sinergia.
478
479